2012, 36(11): 1273-1276.
目的:构建人骨生成诱导因子基因(osteoinductive factor, OIF)慢病毒载体, 并在人主动脉平滑肌细胞(human aorticsmooth muscle cell, HASMC)中稳定过表达OIF。方法:PCR扩增OIF-3FLAG, 并克隆到慢病毒载体pMSCV PIG中, 构建慢病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG, 并测序鉴定。应用脂质体将pMSCV PIG-OIF-3FLAG或pMSCV PIG与VSVG、GAG-POL共转染293T细胞, 48 h后收集细胞上清, 感染HASMC, 48 h后加入嘌呤霉素4 d, 即筛选出稳定过表达pMSCV PIG-OIF-3FLAG的HASMC细胞株, 采用real-time PCR和Western blot检测OIF mRNA和蛋白表达。结果:构建OIF基因慢病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG, 经酶切及测序后证实目的基因的插入位点和读码框正确;包装病毒感染HASMC, 经real-time PCR和Western blot检测证实OIF mRNA和蛋白水平在该细胞株中高表达。结论:成功构建人OIF基因的慢病毒载体, 并获得稳定过表达该基因的HASMC。